60学时         1.5学分       暑期小学期(7月)

主讲教师： 李卫芳、王冬梅、黄成栋、薛林

上课地点： 生物楼扩建楼K211室

实验教学目标与基本要求 通过本课程的教学，使学生了解和掌握现代分子生物学研究的基本原理和方法，包括分子克隆、表达质粒的构建、从表达菌株中分离纯化目的蛋白、以及对目的蛋白进行各种生化鉴定。了解各种因素对实验结果的影响及实验结果的分析方法。训练学生分析问题和解决问题的能力及实际动手能力，同时培养学生对生命科学探索的兴趣和爱好。 课程的重点在于如何运用常规的实验方法设计完成一个完整的研究项目，如何掌握实验条件，根据具体情况修改实验条件，如何进行数据分析同时养成实事求是的科学态度和严谨的工作作风。

要求学生课前预习，实验过程中仔细观察，认真记录，课后撰写论文格式的实验报告。

实验项目

分子部分：

一、试剂的配制、器皿的准备及灭菌

二、大肠杆菌质粒DNA的分离及纯化，DNA的酶切

三、目标DNA片段的电泳分离及回收

四、目标DNA片段与载体DNA片段的连接

五、制备大肠杆菌感受态细胞

六、连接产物转化感受态细胞

七、阳性转化子的筛选与鉴定

生化部分：

一、葡萄糖异构酶（GI）的基因的诱导表达

二、GI粗酶的制备

三、GI的纯化---分级沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换柱层析

四、GI的活力测定

五、GI最适温度测定

六、GI最适pH测定

七、GI热稳定性的测定

八、GI酶动力学参数的测定

九、Bradford法测定样品葡萄糖异构酶的蛋白含量，计算纯化效率

葡萄糖异构酶各纯化步骤学生实验结果 图从左至右依次是葡萄糖异构酶的粗酶、初纯酶、DEAE-Sehparose FF 纯化酶、蛋白质分子量标准的电泳结果

lane I－III：三个菌落PCR结果 lane IV：lambda/EcoR I + Hind III marker lane V: PCR结果 （注：反映体系加入10％的甘油）

离子交换柱层析学生实验结果图